SRDP实验报告范文
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2024-07-12
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SRDP 实验报告范文
一、 实验目的
测定酸模、香蒲、毛茛、青岛藨草、绿萝 5种湿地植物在污水净化过程中根内酸性磷
酸酶、碱性磷酸酶和脲酶活力。
二、实验方法
1.磷酸酶测定方法
(1)根中酸性磷酸酶的测定;(2)根中碱性磷酸酶;(3)水中酸性磷酸酶;
(4)水中碱性磷酸酶。
2.脲酶测定方法
(1)(1)1)根中脲酶活性：奈氏试剂显色法;(2)水中脲酶活性：同根中脲酶活性测定方
法，但酶液是直接取 0.5 mL 的污水。
三、 实验材料及试剂
1.实验材料
实验室条件下用自制污水培养的 5种湿地植物(自移植至实验室新生出的根系要达到
一定量);
2.实验中使用的污水是自配污水，配方如下：水 1L、淀粉 0.067g 、葡萄糖 0.05g、
蛋白胨 0.033g、牛肉膏 0.017g、Na2CO3·10H2O(无水
0.02g)0.067g、NaHCO30.02g、Na3PO40.017g、尿素 0.022g、(NH4)2SO4 0.028g;
3.实验试剂
磷酸酶、脲酶测定过程中需要试剂：
①0.2mol /L pH7.8 磷酸缓冲液
②0.2mol·L - 1 pH 5.8 醋酸钠缓冲液
称取醋酸钠 16.406g，容量瓶定容至 1L，用 0.3 mol/L 的醋酸溶液调节 pH =5.8(用pH
计校正)。
③3N NaOH 溶液
④0.05mol·L - 1 pH 8.7Tris–盐酸缓冲液缓冲液
称取 12.114 克Tris，容量瓶定容至 1L，取 50 毫升 0.1M 三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶
液与 10.3 毫升 0.1N 盐酸混匀后，加水稀释至 100 毫升，再用 pH 计校正。
⑤奈氏试剂：称取 7g 碘化钾溶于 10 ml 水中，将 10g 碘化汞溶于其中。在 100ml 容量
瓶中配置 氧化 溶液，称取氢 钾 24.4g 加入含有 70 ml 水的容量瓶中，放置冷却。把配好的
碘化钾和碘化汞溶液缓缓加入容量瓶，加入的同时要慢慢摇动，加水稀释至刻度，然后摇
匀。将溶液盛放在棕色玻璃瓶中置暗处保存两天后再使用。
⑥10%三氯乙酸
⑦10%酒石酸钾钠
4.实验仪器
高温消解器、紫外分光光度计、离心机、恒温水浴锅、pH 计、研钵、高压灭菌
锅、50mL 具塞(磨口)刻度管。
四、 实验过程
1.系统设置
取30 个1L 容量的大 杯，洗 。将生 比 一致的烧 净 长态势 较 5种植物从清水中取出，植
物根部用 15%的双氧水灭菌处理 10 分钟后，用蒸馏水清洗干净，按照每组湿地植物湿重相
等的原则，放入大烧杯。将烧杯分成 5组，分别栽种香蒲、绿萝、青岛藨草、酸模、毛
茛，每一组由两小组组成，栽种香蒲的两小组编号为 X和X0，栽种 的两小 号绿萝 组编 为 L
和L0，栽种青 藨草的两小 号岛 组编 为 Q和Q0，栽种酸模的两小 号组编 为 S和S0，栽种毛
茛的两小组编号为 M和M0，每 中前者中加入组250ml 自配污水，后者作为对照加入等量
的自来水。
2.测定方法
2.1 磷酸酶测定方法
2.1.1 根中酸性磷酸酶：
酶液提取：称取植物根系材料 0.1g，放入研 ，再向其中加入钵1ml 磷酸缓冲液
(PH7.8)，小心研磨至匀 ，再将其全部吸入离心管中，在浆0℃下1200r/min 转速的条件
下，离心 30min，上清液 待 液，取为 测 0.5 ml。
具体方法：取配置好的 pH 为5.8 的0.2mol·L - 1 醋酸钠缓冲液 70ml ，以之 溶为
剂配成浓度为 0.15g·L - 1 对硝基苯磷酸二钠(pNPP) 酶反应液，加入 0.5 ml 酶液后将
其用黑纸包裹，置于 25 ℃下培养 1小时。向其中加入 1ml3N NaOH 溶液，以 止 促反终 酶
应，使用 α-1860S 紫外可见分光光度计在 405nm 波长处进行比色测定。在单位时间内单
位重量鲜根水解 pNPP 生成的 pNP 量来表示 活性酶(μg·h - 1·g - 1 鲜根)。
2.1.2 根中碱性磷酸酶：测定方法与酸性磷酸酶的类似，唯一的区别是酶反应液是由
Tris-HCl 缓冲液(pH = 8.7) 配制的。
2.1.3 水中酸性磷酸酶：取 0.5 ml 污水作为水中酸性磷酸酶的酶液。具体方法同根中
酸性磷酸酶。
2.1.4 水中碱性磷酸酶：取 0.5 ml 污水作为水中碱性磷酸酶的酶液。具体方法同根中
碱性磷酸酶。
2.2 脲酶测定方法
2.2.1 根中脲酶活性：奈氏试剂显色法。
酶液提取：称取植物根系材料 0.1g，放入研 ，再向其中加入钵1ml 磷酸缓冲液
(PH7)，小心研磨至匀 ，再将其全部吸入离心管中，在浆0℃下1200r/min 转速的条件下，
离心 30min，上清液 待 液，取为 测 0.5 ml。
具体方法：取适量的干 管，并 管 号，依次向其中加入净试 给试 编 2 mL 0.3 mol/L 尿
素-0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液(pH 7)，然后将 管放入试37 ℃恒温水浴锅中，并预热 5
min。1号管作为空白对照，向其中加入 0.5 mL 水，向其余试管分别加入 0.5 mL 酶液，
将所有 管混匀后在试37 ℃水浴锅中恒温水浴条件下反应 5 min。在反 束后向各个应结试
管加入 1.5 mL 10%三氯乙酸使反应终止。取其中的 1 mL 反应液，加入 9mL 蒸馏水稀释反
应液，摇匀后先加入 0.5 mL 10%酒石酸钾钠反应一会，再加入 1.0 mL 奈氏试剂显色。在
波长 420 nm 时测定各管溶液的吸光度，1 号管作对照。最后做出硫酸铵浓度标准曲线，
据此方程计算酶活， 测得铵浓度与吸光度关系拟合方程为
OD420=0.006C+0.0082(R2=0.9991)。
2.2.2 水中脲酶活性：同根中脲酶活性测定方法，但酶液是直接取 0.5 mL 的污水。
五.实验结果及分析
同样每隔48 小时测定湿地植物根内及水体中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和脲酶活力
变化情况见图2-1~图2-15。
由图2-1 可知，不同湿地植物根中碱性磷酸酶活性的变化趋势不同。同一种湿地植物
的污水处理组和空白对照组中的碱性磷酸酶活性的变化趋势一致，且空白对照组中的该酶
的活性高于污水处理组中的活性，两者之间的差距随时间增大。毛茛和绿萝的空白对照组
及污水处理组的根中碱性磷酸酶活性变化趋势相似，均先剧烈下降后缓慢增多或保持较小
幅度的变化。在香蒲、青岛藨草和酸模的空白对照组及污水处理组中该酶活性波动较小，
香蒲和青岛藨草中的趋势是先增加后降低，酸模中的趋势是随时间延长缓慢增加，在后期
增幅较大。总体上 5种植物根中碱性磷酸酶活性进行排序，绿萝中最高，香蒲次之，然后
是青岛藨草，接着是毛茛，最后是酸模。
图2-2 可知，整体上 5种植物根中脲酶活性的变化趋势较一致，大体上呈增加的趋
势，且在96 小时至 144 小时之间根中脲酶活性增加显著。5种植物的空白对照组中的根中
脲酶随时间延长呈递增趋势，与空白对照组相比，5种植物的污水处理组的根中脲酶活性
波动较大，毛茛、香蒲、青藨和酸模的污水处理组中的根中脲酶活性先升高后下降然后再
增加，而绿萝的污水处理组中的根中脲酶活性先下降后增高再略有下降。总体上对5种植
物根中脲酶活性进行排序，绿萝中最高，香蒲次之，然后是酸模，接着是青岛藨草，最后
是毛茛。
摘要：
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SRDP实验报告范文 一、实验目的 测定酸模、香蒲、毛茛、青岛藨草、绿萝5种湿地植物在污水净化过程中根内酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和脲酶活力。 二、实验方法 1.磷酸酶测定方法 (1)根中酸性磷酸酶的测定;(2)根中碱性磷酸酶;(3)水中酸性磷酸酶; (4)水中碱性磷酸酶。 2.脲酶测定方法 (1)(1)1)根中脲酶活性：奈氏试剂显色法;(2)水中脲酶活性：同根中脲酶活性测定方法，但酶液是直接取0.5mL的污水。 三、实验材料及试剂 1.实验材料 实验室条件下用自制污水培养的5种湿地植物(自移植至实验室新生出的根系要达到一定量); 2.实验中使用的污水是自配污水，配方如...
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